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酵母表面展示技術(shù)平臺(tái)

酵母表面展示（Yeast surface display，YSD）是一種強(qiáng)大的蛋白質(zhì)工程技術(shù),是目前蛋白工程中重要的高通量篩選平臺(tái)。酵母細(xì)胞具有真核細(xì)胞翻譯后修飾機(jī)制，能夠幫助目的蛋白正確折疊，可以用來(lái)展示各種真核蛋白，包括抗體、受體、酶和抗原肽等。

阿帕克生物具有經(jīng)驗(yàn)豐富的專業(yè)團(tuán)隊(duì)和先進(jìn)技術(shù)平臺(tái)，結(jié)合流式細(xì)胞分選提供基于酵母表面展示技術(shù)的蛋白質(zhì)工程服務(wù)，用于改善蛋白質(zhì)性質(zhì)，包括親和力、特異性、酶功能和穩(wěn)定性等，歡迎咨詢與合作交流！

技術(shù)原理

NBbiolab酵母表面展示平臺(tái)采用“α-凝集素”展示系統(tǒng)，將納米抗體基因序列和表達(dá)標(biāo)簽HA tag基因序列插入至蛋白質(zhì)支架-Aga2基因的展示質(zhì)粒載體中，該載體使用營(yíng)養(yǎng)標(biāo)記物在酵母中維持選擇性生長(zhǎng)，并通過(guò)培養(yǎng)基中加入半乳糖誘導(dǎo)酵母進(jìn)行表面展示，納米抗體融合蛋白被分泌并錨定在酵母細(xì)胞壁上。再結(jié)合磁珠及流式分選技術(shù)進(jìn)行多輪篩選，可篩選得到高親和力、高穩(wěn)定性的克隆。

圖 阿帕克生物基于a-凝集素的 Saccharomyces cerevisiae 酵母表面展示系統(tǒng)示意圖

酵母表面展示技術(shù)優(yōu)勢(shì)

NBbiolab HITSmart納米抗體發(fā)現(xiàn)服務(wù)

阿帕克生物將酵母表面展示、細(xì)胞流式分選與NGS結(jié)合使用，解放常規(guī)文庫(kù)篩選的局限，實(shí)驗(yàn)效率翻倍，一次實(shí)驗(yàn)可獲得超越傳統(tǒng)篩選方式的百倍優(yōu)質(zhì)克隆！已為多家企業(yè)成功篩選到高親和力抗體（靶點(diǎn)有HSA等）阻斷抗體（靶點(diǎn)有PD-L1、PD-1、CTLA-4、LAG3、TIGIT等），特異性抗體（靶點(diǎn)有CD16a,FcRL5等）和TCR mimic 抗體。

NBbiolab HITSmart納米抗體服務(wù)流程

NBbiolab HITSmart納米抗體服務(wù)優(yōu)勢(shì)

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酵母表面展示VS噬菌體展示（點(diǎn)擊篇名跳轉(zhuǎn)閱讀）

【摘要】酵母表面展示與噬菌體展示相比，具有顯著優(yōu)勢(shì)。酵母具有類似于高等真核生物的分泌途徑，使蛋白質(zhì)能夠正確地折疊和分泌。與噬菌體表面展示不同的是，使用FACS可以基于親和力和展示水平篩選庫(kù)，對(duì)于在酵母表面展示中的高親和力的選擇不受表達(dá)水平的負(fù)面影響，這消除了表達(dá)偏向可能引起的任何潛在偏差。此外，酵母表面展示可實(shí)時(shí)區(qū)分僅在抗體親和力上略有不同的克隆。通過(guò)兩色染色，可以直接在酵母細(xì)胞表面確定抗體親和力，避免了亞克隆、表達(dá)和純化的需要。這種技術(shù)使得在一種展示格式中，可以快速篩選和優(yōu)化目標(biāo)抗體的親和力、穩(wěn)定性和細(xì)胞外表達(dá)。

酵母展示技術(shù)用于提高蛋白質(zhì)的親和力（點(diǎn)擊篇名跳轉(zhuǎn)閱讀）

【摘要】酵母展示技術(shù)可以區(qū)分親和力只有2倍差異的蛋白質(zhì)，具有較高的敏感性，已經(jīng)成為蛋白質(zhì)親和力成熟的重要工具。如圖 4 所示，一般通過(guò)隨機(jī)突變創(chuàng)建大小為107 ?109 的蛋白質(zhì)突變文庫(kù)，經(jīng)電轉(zhuǎn)化和同源重組，這些突變體與 Aga2p 融合展示在酵母表面；通過(guò)與熒光標(biāo)記配體一起孵育，用FACS分選高親和力突變體，每一輪分選的細(xì)胞可以擴(kuò)增培養(yǎng)參與再次分選，從而降低文庫(kù)多樣性，最終獲得少量的高親和力酵母細(xì)胞克隆；也可以提取所選酵母細(xì)胞 DNA，進(jìn)行新一輪隨機(jī)突變，構(gòu)建新的展示文庫(kù)，參與新一輪分選，直到篩選出所需親和力的蛋白質(zhì)。

酵母展示技術(shù)用于TCR工程化改造（點(diǎn)擊篇名跳轉(zhuǎn)閱讀）

【摘要】體內(nèi)天然的TCRs雖然表現(xiàn)出與抗體相似的遺傳和序列多樣性，但TCRs的結(jié)合親和力比抗體要低幾個(gè)數(shù)量級(jí)。盡管TCR親和力與T細(xì)胞活性之間的相關(guān)性存在一些分歧，但選擇高親和力TCR或通過(guò)定向進(jìn)化微調(diào)TCR的親和力都是改善TCR-T抗腫瘤反應(yīng)的技術(shù)手段。通過(guò)酵母表面展示技術(shù)對(duì)TCR的重鏈和輕鏈可變區(qū)的互補(bǔ)決定區(qū)進(jìn)行隨機(jī)突變得到酵母展示文庫(kù)，經(jīng)過(guò)多輪篩選，定向進(jìn)化后的TCR可實(shí)現(xiàn)皮摩爾范圍內(nèi)的親和力。與噬菌體展示方法相比，使用酵母表面展示TCR定向進(jìn)化的一個(gè)主要優(yōu)點(diǎn)是它能夠直接評(píng)估在酵母細(xì)胞上表達(dá)的TCR或突變體的結(jié)合親和力，而不需要經(jīng)過(guò)大量的蛋白質(zhì)表達(dá)和純化步驟。

酵母表面展示技術(shù)用于酶的定向進(jìn)化（點(diǎn)擊篇名跳轉(zhuǎn)閱讀）

【摘要】酶蛋白有廣泛的應(yīng)用價(jià)值，參與各種化學(xué)反應(yīng)，包括分解、合成和能量轉(zhuǎn)化等。

通過(guò)定向進(jìn)化，人們可以調(diào)整酶蛋白的結(jié)構(gòu)和活性，使其更具高效性和特異性。使用酵母展示技術(shù)已成功實(shí)現(xiàn)了酶的人工定向進(jìn)化。多種酶已成功展示在酵母細(xì)胞表面。米黑根毛霉脂肪酶(RML)是一種生物催化劑，通過(guò)定點(diǎn)突變并展示在酵母細(xì)胞表面，得到的突變體顯示出比原始酶活性更高的酯化活性，可應(yīng)用于食品工業(yè)、精細(xì)化工和生物柴油生產(chǎn)。 抗壞血酸過(guò)氧化物酶(APEX)是一種工程過(guò)氧化物酶，通過(guò)酵母展示系統(tǒng)進(jìn)行定向進(jìn)化，創(chuàng)造了進(jìn)化的分裂APEX2系統(tǒng)，具有較高的過(guò)氧化物酶活性，可應(yīng)用于新領(lǐng)域的生物學(xué)研究。使用酵母展示系統(tǒng)展示的β-葡萄糖苷酶，可以增加飲料的香氣和風(fēng)味。