噬菌體展示技術(shù)平臺
噬菌體展示是一種基于噬菌體表面展示外源多肽、抗體或蛋白質(zhì)的技術(shù),可以高通量地篩選出具有特異性的抗體或蛋白質(zhì),因此被廣泛應(yīng)用于新藥研發(fā)、抗體篩選、疫苗開發(fā)等領(lǐng)域。該技術(shù)最早由George P. Smith等人于1985年首次報道,并在90年代初由John McCafferty和Gregory Winter應(yīng)用在抗體工程領(lǐng)域。之后經(jīng)過不斷改進(jìn)和完善,已經(jīng)成為現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域中的重要工具之一。2018年,噬菌體展示研究的兩位先驅(qū),美國科學(xué)家喬治·史密斯(George P. Smith)和英國科學(xué)家格雷格·文特(Gregory P.Winter)榮獲諾貝爾化學(xué)獎。
噬菌體展示的原理
噬菌體展示技術(shù)是將外源的多肽,抗體等片段,插入到噬菌體的結(jié)構(gòu)基因,常見的是與PIII或PVIII融合表達(dá),被展示在噬菌體表面的分子仍然保持生物活性。要從噬菌體文庫中挑選出想要的分子,就要經(jīng)過 “淘篩”。該過程簡單地說就是被展示在噬菌體表面的肽庫或者蛋白庫能夠特異地與目標(biāo)抗原識別并結(jié)合,經(jīng)過足夠時間的孵育之后,可使用洗滌液洗去與抗原結(jié)合較弱或者未結(jié)合的游離噬菌體。隨后將特異性結(jié)合的目標(biāo)噬菌體洗脫下來,感染大腸桿菌并進(jìn)行擴(kuò)增以得到下一輪的子噬菌體庫。隨后經(jīng)過2輪~3輪的“吸附-洗脫-擴(kuò)增”富集過程后,能夠與抗原特異性結(jié)合的噬菌體的比例得到了逐步提高。最終獲得能夠識別靶分子的多肽或者蛋白,可被用于后續(xù)的實驗。

圖. 阿帕克生物噬菌體展示技術(shù)平臺篩選抗體流程示意圖
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